Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中不断扩展

从第一次经常出现呼吸道自身血清到经常出现1标准型乳癌流行病学腹泻的十分困难叛将在儿童时期就有很好的描绘，多个呼吸道自身血清无腹泻的儿童中都有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的儿童这一分之一减低到84%。相比之下，占流行病学1标准型乳癌一半以上的标准型1标准型乳癌的患病机制还不能得到更进一步的研究工作。

越来越多的人开始运用于其所于管理系统来定义1标准型乳癌的十分困难：生物微在经常出现多种呼吸道自身血清时转到第1收尾，经常出现血糖精神状态时转到第2收尾，经常出现腹泻时转到第3收尾。一些多发呼吸道自身血清无腹泻的生物微，在1期和2期，十分困难较比较慢，并转变为患病的1标准型乳癌。我们早先描绘了一分组在首次测定到多种呼吸道自身血清采样后据估计10年无乳癌的极比较慢十分困难者，这分组症状数量寡，但构造更为完全一致。随后，我们发现呼吸道自身蛋白选择性CD8+T蛋白自由基在十分困难很比较慢的症状中都前提不发挥作用，但在近期患病和经常性发挥作用的乳癌症状中都很容易测定到。这可能表明，与十分困难症状相比，这些症状化脓性自由基的调控大幅提高。

早期研究工作表明，尽管调控性T蛋白(Treg)数量正常，但乳癌症状发挥作用一些特性瑕疵，其中都有数对IL-2的自由基灵活性降低。此外，乳癌症状中都的效其所CD4+T蛋白可能对调控更为重要抵抗性，显出为效其所T蛋白的选择性减弱，自然产生的Treg和胃产生的游离Treg，以及蛋白经历的CD4+T蛋白中都IL-2自由基减弱。本研究工作的旨在是描绘了CD4+调控性T蛋白(Treg)在大群极很比较慢十分困难者中都的构造，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以老年人为基础的纵向研究工作，在21岁以下住院的症状亲属中都定期检查1标准型乳癌的危险因素。我们早先描绘了经常性很比较慢十分困难者的构造，他们保有多重呼吸道自身血清无腹泻有约10年，但不能经常出现乳癌的流行病学腹泻，比较慢性或非完成性化脓性。随后，10名继续保有无乳癌并情愿提供大量血液采样的很比较慢十分困难者纳入T和B蛋白特性分析。在目前的研究工作中都，8名比较慢十分困难者(SP分组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身血清无腹泻。所有的参与者都处于1标准型乳癌十分困难的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身血清对某些蛋白的无腹泻自由基，然而，一名症状已经处于2期据估计6年，但不能经常出现流行病学腹泻，一名症状被诊断为乳癌，该受试者72岁，在搜集检验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该供微完成了实质上评量。剥离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多值流式蛋白奥义和T蛋白选择性试制评量供微中都Treg的Hz、表现标准型和特性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和紧接著)完成无监督聚类分析，评量Treg表现标准型。

结果：与肥胖症供微相比，来自比较慢十分困难微的清醒CD4+T蛋白的监督聚类推测，激活的清醒CD4+ TregHz减低，与止痛药游离的TNFR相关蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的症状与十分困难很比较慢者和匹配的对照分组相比，Treg谱有所区别。特性分析表明，与肥胖症供微相比，来自很比较慢十分困难微的Treg介导的CD4+效其所T蛋白选择性轻微受损。显出为对效其所CD4+T蛋白CD25和CD134传达的选择性减低。

所示1 侧重的表现标准型分析推测，CD4+Treg亚标准型在比较慢十分困难路由表中都减低。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有供微的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物传达鉴定出10个元簇:清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个完全相同Treg标上降解的10个元簇的MST。每个数据流代表一个协同(100个协同)，较大的元协同(10个元协同)在数据流分组四周成品。每个数据流中都的饼所示对此单个标上的传达级别。(b)每个元聚类的热所示，以推测整微标上传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)降解所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较数量级为每个metacluster盒中央线所示(数量级> 0.05%)确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T蛋白(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T蛋白(l)。黄色边框代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检测。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的预测模标准型声称，TregHz的减低是十分困难很比较慢的图标。国际标准门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的近现代所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达完成剥离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(外缘)和SP(蓝点)分组以及供微SP 606(黄色)中都CD25+ cd127的Hz摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的盒中央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达高强度着色，标记突出的簇被定位为SP和HD路由表错综复杂的完全相同。(j)盒中央线所示推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相较数量级(分之一)。(k)直方所示推测每个簇的表现标准型(粉红色)和Treg标上相较传达与时代背景传达(黄色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。时代背景与所有其他簇中都标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检测

所示3 与肥胖症献血者相比，十分困难很比较慢者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T蛋白元簇(清醒T蛋白_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T蛋白;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个传达标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的传达热所示(sp606不有数在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon分组符号秩和检测，p< 0.07(黄色)所有供微有数，p< 0.05(黄色)供微SP 606和匹配的HD不有数在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从国际标准门控，从所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，推测直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检测

所示4 来自很比较慢十分困难的CD4+ treg蛋白控制效其所CD4+T蛋白的灵活性降低。SP分组用黄色的中央线和边框对此，HD分组用红色的中央线和边框对此，黄色的中央线/边框对此供微sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被标上为CFSE, Treg按捕捉到的分之一自由基物。用抗CD3 /28微珠增殖蛋白，人才培养3天后完成流式蛋白奥义测定。(a-d)与CD4+接收者者相较其所的treg人才培养(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才培养。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE选择性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性多于。运用于无腹泻对照(激活的响其所蛋白不含treg)计算选择性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 效其所CD4+T蛋白对很比较慢十分困难的T蛋白增殖的选择性更敏感。SP分组用黄色的中央线和边框对此，HD分组用红色的中央线和边框对此，黄色的中央线/边框对此供微sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标上，treg按捕捉到的分之一自由基物。用抗CD3 /28微珠增殖蛋白，人才培养3天后完成流式蛋白奥义(CD25反染)和蛋白因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才培养。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE选择性%-(b)。(c,d) CD25选择性%-(c)和CD134选择性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们结论的事实是，来自很比较慢十分困难叔父的增殖清醒CD4+Treg在GITR传达中都得到了扩大和非常丰富，强调了进一步研究工作Treg在1标准型乳癌安全性生物微中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28