Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身HIV到注意到1HG心血管疾病临床深入研究副作用的重大突破率在学龄前时期就有极好的详细描述，多个呼吸道自身HIV感染性的学龄前里有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的学龄前这一比重减少到84%。相较之下，占临床深入研究1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的复发机制还没有人赢取充分的深入研究。

越来越多的人开始用到分期系统对来表述1HG心血管疾病的重大突破：生物体在注意到多种呼吸道自身HIV时进入第1收尾，注意到血糖异常时进入第2收尾，注意到副作用时进入第3收尾。一些多发呼吸道自身HIV感染性的生物体，在1期和2期，重大突破较很慢，并发展为复发的1HG心血管疾病。我们在此之后详细描述了一四组在首次验证到多种呼吸道自身HIV取样后有数10年无心血管疾病的想像中很慢重大突破者，这四组高血压伤亡人数少，但特质非常指明。随后，我们注意到呼吸道自身蛋白质免疫CD8+T蛋白中间体在重大突破较快的高血压里基本不存有，但在全面性复发和依然存有的心血管疾病高血压里很更容易验证到。这显然表明，与重大突破高血压相较，这些高血压自身免疫中间体的缓冲增强。

早期深入研究表明，尽管缓冲性T蛋白(Treg)数量正常，但心血管疾病高血压存有一些功用局限性，其里仅限于对IL-2的中间体能力降低。此外，心血管疾病高血压里的效应CD4+T蛋白显然对缓冲增添抵抗性，展现出为效应T蛋白的诱发消退，自然现象造成的Treg和体外造成的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T蛋白里IL-2中间体消退。本深入研究的借以是详细描述了CD4+缓冲性T蛋白(Treg)在一小群想像中较快重大突破者里的特质，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX深入研究是一项以许多人为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的高血压亲属里检查1HG心血管疾病的危险因素。我们在此之后详细描述了依然较快重大突破者的特质，他们保持多重呼吸道自身HIV感染性有约10年，但没有人注意到心血管疾病的临床深入研究副作用，很慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续保持无心血管疾病并不想提供大量尿液取样的较快重大突破者划定T和B蛋白功用分析方法。在现在的深入研究里，8名很慢重大突破者(SP四组)，里位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身HIV感染性。所有的自发性都处于1HG心血管疾病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身HIV对某些蛋白质的感染性中间体，然而，一名高血压早已处于2期有数6年，但没有人注意到临床深入研究副作用，一名高血压被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在野外科学研究取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法里对该遗传物质来进行了之外分析方法。受控外周血单个质子蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白忍术和T蛋白诱发试验分析方法遗传物质里Treg的阈值、表HG和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)来进行无督导聚类分析方法，分析方法Treg表HG。

结果：与生活品质遗传物质相较，来自很慢重大突破体的思绪CD4+T蛋白的督导聚类推断，激活的思绪CD4+ Treg阈值减少，与糖皮质激素诱导的TNFR具体蛋白(GITR)隐含减少有关。一名HbA1c升高的高血压与重大突破较快者和冗余的对照四组相较，Treg对光有所各不相同。功用分析方法表明，与生活品质遗传物质相较，来自较快重大突破体的Treg内源性的CD4+效应T蛋白诱发明显受损。展现出为对效应CD4+T蛋白CD25和CD134隐含的诱发减少。

三幅1 深入的表HG分析方法推断，CD4+Treg亚HG在很慢重大突破函数调用里减少。由FlowSOM填充的Treg四楼，涌进在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标明物隐含解剖出10个元簇:思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用到9个各不相同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点四组周围上色。每个节点里的饼三幅说明单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整体而言标明隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)填充三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster装入中央线三幅(总质量> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白(l)。紫色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg阈值的减少是重大突破较快的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP自发性和冗余的HD自发性在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的权威性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR隐含来进行受控，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(布氏)四组以及遗传物质SP 606(紫色)里CD25+ cd127的阈值汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的装入中央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含其中心纹理，箭头厚实的簇被标识为SP和HD函数调用之间的各不相同。(j)装入中央线三幅推断了在SP(布氏)和HD(灰点)四组里，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(比重)。(k)直方三幅推断每个簇的表HG(粉红色)和Treg标明一般来说隐含与背景隐含(紫色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

三幅3 与生活品质献血者相较，重大突破较快者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T蛋白元簇(思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个隐含标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热三幅(sp606不仅限于在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含串联，推断直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有遗传物质仅限于，p< 0.05(紫色)遗传物质SP 606和冗余的HD不仅限于在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR隐含，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)串联，推断直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

三幅4 来自较快重大突破的CD4+ treg蛋白依靠效应CD4+T蛋白的能力降低。SP四组用紫色的中央线和边框说明，HD四组用蓝色的中央线和边框说明，紫色的中央线/边框说明遗传物质sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按仔细观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠重置蛋白，培训3天后来进行流式蛋白忍术验证。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说应的treg培训(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培训。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。用到感染性对照(激活的响应蛋白不含treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 效应CD4+T蛋白对较快重大突破的T蛋白重置的诱发更敏感。SP四组用紫色的中央线和边框说明，HD四组用蓝色的中央线和边框说明，紫色的中央线/边框说明遗传物质sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按仔细观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠重置蛋白，培训3天后来进行流式蛋白忍术(CD25反染)和蛋白因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培训。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较快重大突破子的重置思绪CD4+Treg在GITR隐含里赢取了扩展和充沛，特别强调了促使深入研究Treg在1HG心血管疾病风险生物体里的表征的有效性。

原文应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28