Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型哮喘患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出家兔自身抗棒状到显现出1同型肝炎针灸副作用的令人满意率在学龄前末期就有很好的描绘，多个家兔自身抗棒状HIV的学龄前里有70%在血清转换成后10年内患上肝炎，而随访15年的学龄前这一%-提高到84%。比起，占针灸1同型肝炎一半以上的同型1同型肝炎的发病机制还未给与充分的研究成果。

日益多的人开始运用于分期系统会来定义1同型肝炎的令人满意：个棒状在显现出多种家兔自身抗棒状时离开第1期中，显现出摄入量诱发时离开第2期中，显现出副作用时离开第3期中。一些多发家兔自身抗棒状HIV的个棒状，在1期和2期，令人满意较慢，并持续发展为发病的1同型肝炎。我们在此之后描绘了一分组在首次样品到多种家兔自身抗棒状验证后大概10年无肝炎的亦非慢令人满意者，这分组高血压次数少，但特征非常清楚。随后，我们辨认出家兔自身抗原专一性CD8+T肝细胞反应在令人满意加速的高血压里必需不存在，但在近来发病和或多或少的肝炎高血压里很较难样品到。这可能证明，与令人满意高血压远比，这些高血压自身免疫反应的闭环增强。

早期研究成果证明，尽管闭环性T肝细胞(Treg)数量正常，但肝炎高血压存在一些功能缺陷，其里包括对IL-2的反应能力减缓。此外，肝炎高血压里的物理现象CD4+T肝细胞可能对闭环非常具抵抗性，发挥为物理现象T肝细胞的消除减弱，自然产生的Treg和棒状外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞里IL-2反应减弱。本研究成果的目的是描绘了CD4+闭环性T肝细胞(Treg)在一小群亦非加速令人满意者里的特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX研究成果是一项以许多人辅以的垂直研究成果，在21岁以下肺癌的高血压亲属里检查1同型肝炎的危险因素。我们在此之后描绘了长期加速令人满意者的特征，他们保持稳定多重家兔自身抗棒状HIV超过10年，但未显现出肝炎的针灸副作用，慢性或非癫痫自身免疫。随后，10名继续保持稳定无肝炎并希望提供大量体液验证的加速令人满意者纳入T和B肝细胞功能量化。在以外的研究成果里，8名慢令人满意者(SP分组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗棒状HIV。所有的旁观者都处于1同型肝炎令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗棒状对某些抗原的HIV反应，然而，一名高血压已经处于2期大概6年，但未显现出针灸副作用，一名高血压被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集实验验证时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据量化里对该小分子透过了单独量化报告。剥离外周血单个核分裂肝细胞(PBMCs)，采用多数值流式肝细胞心法和T肝细胞消除试验量化报告小分子里Treg的频谱、表同型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类验证、总括和回归)透过无指导聚类量化，量化报告Treg表同型。

结果：与身棒状健康小分子远比，来自慢令人满意棒状的无意识CD4+T肝细胞的指导聚类辨识，激来生的无意识CD4+ Treg频谱提高，与免疫抑制诱导的TNFR相关蛋白(GITR)暗示提高有关。一名HbA1c增大的高血压与令人满意加速者和匹配的解读分组远比，Treg谱有所各有不同。功能量化证明，与身棒状健康小分子远比，来自加速令人满意棒状的Treg介导的CD4+物理现象T肝细胞消除明显受损。发挥为对物理现象CD4+T肝细胞CD25和CD134暗示的消除提高。

左图1 深入的表同型量化辨识，CD4+Treg亚同型在慢令人满意函数调用里提高。由FlowSOM生成的Treg寝室，汇聚在来自所有小分子的来生CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标明物暗示验证出10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)运用于9个各有不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个终端代表一个战略性(100个战略性)，非常大的元战略性(10个元战略性)在终端分组一处上色。每个终端里的饼左图坚称单个标明的暗示档次。(b)每个元聚类的热左图，以辨识整棒状标明暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成左图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的基岩。(e-l)比起丰度为每个metacluster装入点阵左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。紫色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的预测模同型证实，Treg频谱的提高是令人满意加速的标志。标准门控(a - f)和柑桔量化(g-k)相比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过剥离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)分组以及小分子SP 606(紫色)里CD25+ cd127的频谱汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装入点阵左图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度后处理，箭头突出的簇被辨识为SP和HD函数调用之间的各有不同。(j)装入点阵左图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起丰度(%-)。(k)直方左图辨识每个簇的表同型(粉红色)和Treg标明比起暗示与氛围暗示(黄色);上列，线程Treg_3;比如说一行，线程Treg_4。氛围与所有其他簇里标明的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

左图3 与身棒状健康献血者远比，令人满意加速者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个暗示标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的暗示热左图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(紫色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR暗示串联，辨识直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(紫色)所有小分子包括，p< 0.05(黄色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从标准门控，从所有HD(紫色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)串联，辨识直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

左图4 来自加速令人满意的CD4+ treg肝细胞控制物理现象CD4+T肝细胞的能力减缓。SP分组用黄色的线或和圆圈坚称，HD分组用黄色的线或和圆圈坚称，紫色的线或/圆圈坚称小分子sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(此番者)被标明为CFSE, Treg按仔细观察的%-校准。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，指导3天后透过流式肝细胞心法样品。(a-d)与CD4+此番者比起应的treg指导(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。运用于HIV解读(激来生的积亦非响应肝细胞仅有treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

左图5 物理现象CD4+T肝细胞对加速令人满意的T肝细胞还原的消除非常敏感性。SP分组用黄色的线或和圆圈坚称，HD分组用黄色的线或和圆圈坚称，紫色的线或/圆圈坚称小分子sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标明，treg按仔细观察的%-校准。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，指导3天后透过流式肝细胞心法(CD25反染)和肝细胞因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606此番者联合指导。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE消除%-(b)。(c,d) CD25消除%-(c)和CD134消除%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速令人满意子的还原无意识CD4+Treg在GITR暗示里给与了扩张和珍贵，强调了进一步研究成果Treg在1同型肝炎风险个棒状里的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28